免疫組化的局限性。靈敏度高、精確性和特異性是一種理想的cancer標(biāo)記物必須具有的,但至今所發(fā)現(xiàn)的cancer標(biāo)記物還沒有能完全滿足這些標(biāo)準(zhǔn)。某些正常細(xì)胞也分泌一些cancer標(biāo)記物,因此cancer細(xì)胞學(xué)并不是單獨(dú)產(chǎn)生一種標(biāo)記物,即選用一組抗體比單一抗體更有利。在cancer診斷中評估免疫組化的局限性主要在抗體特異性和解釋方面。在免疫組化操作中都必須有適當(dāng)?shù)年栃耘c陰性對照,作為技術(shù)完整性質(zhì)量控制,如對照組被忽略或不理想時,免疫組化染色的結(jié)果要謹(jǐn)慎對待,免疫組化的正確結(jié)果不僅要依靠技術(shù)步驟上規(guī)范化操作,而且有賴于正確的解釋,在報(bào)告免疫組化染色結(jié)果時不應(yīng)孤立地解釋,應(yīng)考慮到診斷與鑒別診斷、所應(yīng)用的抗體特性、所研究組織性質(zhì),同時還要注意假陽性與假陰性結(jié)果的干擾。英瀚斯生物,組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報(bào)告分析,一站式搞定!江西小鼠免疫組化價(jià)格
免疫組化技術(shù)有哪些應(yīng)用?
定位和定性是免疫組化比較大的優(yōu)勢。相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高,是定位檢測分析優(yōu)先方法,尤其對于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。免疫組織化學(xué)的臨床應(yīng)用主要包括以下幾方面:惡性**的診斷與鑒別定性;確定轉(zhuǎn)移性惡性**的原發(fā)部位;對某類**進(jìn)行進(jìn)一步的病理分型;軟組織**診斷;為臨床提供治療方案的選擇;近年來,隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的出現(xiàn),使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實(shí)用價(jià)值受到了普遍的認(rèn)可,其在低分化或未分化**的鑒別診斷時,準(zhǔn)確率可達(dá)50%-75%。
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醫(yī)療和預(yù)后有關(guān)的免疫組化。與醫(yī)療及預(yù)后有關(guān)的標(biāo)記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標(biāo)記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等,卵巢上皮性cancer中P53的過表達(dá)與cancer的擴(kuò)散、分化、術(shù)后殘存cancer灶呈正相關(guān);乳腺cancer中表達(dá)C-erbB2的浸潤性cancer患者預(yù)后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達(dá)增高,PTEN基因表達(dá)減弱,提示cancer預(yù)后不良。(2)細(xì)胞增殖性標(biāo)記物:cancer細(xì)胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫(yī)療與預(yù)后,如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細(xì)胞的增生做出評價(jià),表達(dá)指數(shù)越高,表明其增殖指數(shù)越活躍,惡性度增高,預(yù)后不良,其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發(fā)現(xiàn)Ki-67、EGFR陽性者,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,并與ji素受體的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等,應(yīng)用更為范圍廣的的是子宮內(nèi)膜cancer及乳腺cancer,如對乳腺cancer中ER、PR的檢測,有助于決定臨床醫(yī)療中是否需要加入內(nèi)分泌ji素阻斷醫(yī)療,并能判斷預(yù)后,ER及PR陽性表達(dá)、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達(dá)病例對三苯氧胺等ji素醫(yī)療反應(yīng)良好,而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。
免疫組化染色切片的好壞直接影響著病理醫(yī)生對其染色結(jié)果的判斷,進(jìn)而影響病理診斷,所以制作一張良好的免疫組化切片至關(guān)重要,它需要病理醫(yī)生與病理技師兩者間的相互協(xié)調(diào),密切配合和共同努力,病理醫(yī)生選擇抗體,設(shè)置對照,判讀結(jié)果,指導(dǎo)技術(shù);而技術(shù)人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,保證染色質(zhì)量。在免疫組化切片的制作過程存在多個環(huán)節(jié),每一環(huán)節(jié)的失誤都可能影響檢測結(jié)果,如抗原保存,蛋白酶消化,增強(qiáng)技術(shù)及對抗體的管理、使用和試劑的濃度等等,因此制作一張高質(zhì)量的免疫組織化學(xué)切片是多方面相互配合的結(jié)果。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實(shí)驗(yàn)指南!
免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體
免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
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免疫組化常用的染色方法
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。 英瀚斯實(shí)驗(yàn)外包,病理染色切片免疫組化,效率高!福建靠譜免疫組化檢測
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免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟
免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括組織固定、切片、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育、二抗孵育、顯色和復(fù)染等。首先,組織樣本需要經(jīng)過固定(如福爾馬林固定)以保持其形態(tài)結(jié)構(gòu)。然后,將固定后的組織包埋在石蠟中并切成薄片??乖迯?fù)是為了暴露被固定過程掩蓋的抗原表位,常用的方法有熱修復(fù)和酶消化。封閉步驟是為了減少非特異性結(jié)合,通常使用血清或BSA。一抗孵育是關(guān)鍵步驟,一抗與目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合。二抗孵育則是通過二抗與一抗結(jié)合,并連接顯色系統(tǒng)。,通過顯色和復(fù)染使目標(biāo)蛋白可視化。 江西小鼠免疫組化價(jià)格