陜西組織免疫組化實(shí)驗(yàn)

免疫組化的發(fā)展路程？在臨床病理診斷中，免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段，從20世紀(jì)70年代開始，免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷，對(duì)于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響，同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過(guò)程的認(rèn)識(shí)，提高了病理診斷與研究水平。但是，隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù)，必須熟悉各種抗體真陽(yáng)性反應(yīng)部位，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化，使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。大鼠、小鼠組織免疫組化，找英瀚斯生物。陜西組織免疫組化實(shí)驗(yàn)

免疫組化實(shí)驗(yàn)流程介紹：

英瀚斯生物為您整理總結(jié)免疫組化詳細(xì)步驟：

1、SP三步法

1）石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水。

2）0.3%或3%H2O2去離子水（無(wú)色液體）孵育10-30分鐘，以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。

3）蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘

4）候選步驟：采用抗原修復(fù)：微波（建議30分鐘內(nèi)4次中火）、高壓、酶修復(fù)方法。自然冷卻，再用3分鐘×3次.

5）血清封閉：室溫15-30分鐘，盡可能與二抗來(lái)源一致。傾去，勿洗。

6）滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗，37℃孵育2~3小時(shí)或4℃過(guò)夜（比較好復(fù)溫）。PBS沖洗，3分鐘×5次。

7）滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

8）PBS沖洗，3分鐘×5次。

9）滴加SP（鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1h。

10）PBS沖洗，3分鐘×5次。

11）顯色劑顯色（DAB等）。

12）自來(lái)水充分沖洗。

13）可進(jìn)行復(fù)染，脫水，透明。

14）選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?山東什么是免疫組化怎么樣免疫組化的樣本保存要求是什么？

免疫組化實(shí)驗(yàn)所用的抗體

免疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動(dòng)物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動(dòng)物后，從動(dòng)物血中所獲得的免疫血清，是多個(gè)B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

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免疫組化常用的染色方法

根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。

英瀚斯生物為您整理免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復(fù)，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過(guò)氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過(guò)夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應(yīng)種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來(lái)水沖洗，氨水返藍(lán)，流水沖洗。

12、切片經(jīng)過(guò)梯度酒精（70-100%）10min一個(gè)梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 英瀚斯生物，可做免疫組化定量分析。

免疫組化的顯色系統(tǒng)

免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見信號(hào)的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察，但不適合長(zhǎng)期保存。此外，還有熒光顯色系統(tǒng)，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)設(shè)備。 免疫組化怎么做？步驟方法？山東什么是免疫組化怎么樣

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免疫組化的定量分析怎么做？

免疫組化的定量分析是通過(guò)圖像分析軟件對(duì)顯色結(jié)果進(jìn)行定量評(píng)估。免疫組化常用的方法有光密度分析和陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)。光密度分析是通過(guò)測(cè)量顯**域的光密度值，評(píng)估目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)是通過(guò)計(jì)數(shù)顯色陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量，評(píng)估目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。定量分析需要考慮多個(gè)因素，如顯色強(qiáng)度、背景信號(hào)和切片厚度。此外，免疫組化定量分析的結(jié)果通常只能進(jìn)行半定量分析，不能提供***的定量數(shù)據(jù)。 陜西組織免疫組化實(shí)驗(yàn)