啟動(dòng)反應(yīng)與結(jié)果分析確認(rèn)參數(shù)無誤后,啟動(dòng) qPCR 程序,儀器自動(dòng)運(yùn)行并實(shí)時(shí)顯示熒光曲線。反應(yīng)結(jié)束后,通過軟件查看結(jié)果:定量結(jié)果:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣本的初始模板濃度(定量),或通過 ΔΔCt 法分析相對(duì)表達(dá)量(相對(duì)定量)。溶解曲線:若出現(xiàn)單一尖銳峰,說明擴(kuò)增特異性良好;若有雜峰,需排查引物或反應(yīng)條件問題。 污染防控(重點(diǎn))核酸污染:嚴(yán)格分區(qū)操作:將試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR 擴(kuò)增區(qū)分開,避免交叉污染。使用濾芯吸頭,每次加樣后更換吸頭,避免移液器接觸樣本或試劑瓶口。定期用 10% 次氯酸鈉或 DNA 酶清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、移液器和儀器樣品槽,紫外燈照射消毒操作區(qū)(30 分鐘以上)。試劑污染:試劑分裝保存(避免反復(fù)凍融),陰性對(duì)照(無模板)和空白對(duì)照(無菌水)必須設(shè)置,以監(jiān)測(cè)是否污染。RePure-(D)B可通過遠(yuǎn)程監(jiān)控和數(shù)據(jù)傳輸功能,隨時(shí)隨地查看實(shí)驗(yàn)進(jìn)展和數(shù)據(jù)變化。無錫梯度基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格
溫度與反應(yīng)體系控制溫度準(zhǔn)確性:定期校準(zhǔn)儀器(由專業(yè)人員進(jìn)行),確保變性、退火溫度精細(xì)(偏差超過 ±0.5℃會(huì)影響結(jié)果)。體系一致性:加樣時(shí)確保各孔反應(yīng)體積一致(誤差≤1μL),避免因體積差異導(dǎo)致 Ct 值偏差。避免氣泡:加樣后若有氣泡,需輕輕敲擊板壁或離心去除,否則氣泡會(huì)干擾熒光信號(hào)采集。3. 試劑與樣本處理酶的保存:qPCR Mix 需 - 20℃冷凍保存,使用時(shí)冰上融化,輕輕混勻(勿震蕩,防止酶變性)。模板質(zhì)量:避免模板中含 EDTA、SDS 等抑制劑,若樣本濃度過低,可適當(dāng)增加模板量(但需注意體積占比,避免影響反應(yīng)體系)。江蘇定性基因擴(kuò)增儀PCR儀廠家RePure-A即時(shí)獲取實(shí)時(shí)數(shù)據(jù),增強(qiáng)了實(shí)驗(yàn)的可控性和數(shù)據(jù)可靠性。
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)學(xué)診斷:用于檢測(cè)病原體(如病毒、細(xì)菌、***等)的核酸,實(shí)現(xiàn)疾病的早期診斷,如核酸檢測(cè);還可用于遺傳性疾病的基因診斷、**的分子診斷等。生物學(xué)研究:在基因表達(dá)分析、基因克隆、基因分型、DNA測(cè)序等基礎(chǔ)研究中發(fā)揮著重要作用,有助于深入了解基因的結(jié)構(gòu)和功能。法醫(yī)鑒定:通過對(duì)犯罪現(xiàn)場(chǎng)遺留的生物樣本(如血液、毛發(fā)、唾液等)進(jìn)行基因擴(kuò)增和分析,實(shí)現(xiàn)個(gè)體識(shí)別、親子鑒定等目的。農(nóng)業(yè)領(lǐng)域:可用于農(nóng)作物品種鑒定、轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)、植物病害檢測(cè)等,保障農(nóng)業(yè)生產(chǎn)安全和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量。
儀器操作設(shè)置放置樣品板:將密封好的 96 孔板平穩(wěn)放入 qPCR 儀的樣品槽,確保孔位對(duì)齊,蓋緊儀器艙門。程序設(shè)置(通過儀器軟件):預(yù)變性:通常 95℃,30 秒 - 5 分鐘(熱啟動(dòng)酶,使模板完全變性)。循環(huán)階段(變性→退火→延伸,同時(shí)采集熒光):變性:95℃,5-15 秒(使 DNA 解鏈)。退火 / 延伸:根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置溫度(一般 55-65℃),20-30 秒(引物結(jié)合并延伸,熒光染料 / 探針在此階段發(fā)光)。循環(huán)次數(shù):通常 35-40 次(根據(jù)模板濃度調(diào)整)。溶解曲線(可選):用于驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性,程序?yàn)?95℃ 15 秒→60℃ 1 分鐘→緩慢升溫至 95℃,同時(shí)連續(xù)采集熒光(觀察是否有單一峰,排除非特異性擴(kuò)增或引物二聚體)。熒光通道選擇:根據(jù)使用的熒光染料 / 探針類型選擇(如 SYBR GreenⅠ 對(duì)應(yīng) FAM 通道,TaqMan 探針根據(jù)標(biāo)記熒光選擇)。樣本信息錄入:在軟件中標(biāo)記樣品類型(如標(biāo)準(zhǔn)品、未知樣本、陰性對(duì)照、空白對(duì)照)及孔位對(duì)應(yīng)關(guān)系。RePure-A的應(yīng)用場(chǎng)景極為廣闊,適用于基因表達(dá)分析、遺傳病檢測(cè)、微生物學(xué)研究等多個(gè)領(lǐng)域。
PCR儀是利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),在體外對(duì)特定DNA片段進(jìn)行大量擴(kuò)增的儀器。其原理是通過高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。具體過程如下:高溫變性:將待擴(kuò)增的DNA雙鏈在高溫(90-95℃)下解鏈,形成單鏈DNA模板。低溫退火:降低溫度(一般為50-65℃),使引物與單鏈DNA模板特異性結(jié)合。適溫延伸:在DNA聚合酶的作用下,以引物為起始點(diǎn),在適宜溫度(一般為72℃左右)下,以dNTP為原料,沿著模板鏈合成新的DNA鏈。RePure-(D)B梯度功能具有靈活性,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自定義溫度梯度范圍和步長(zhǎng),滿足不同實(shí)驗(yàn)的要求。江蘇定量基因擴(kuò)增儀PCR儀
RePure-A的光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)過精心設(shè)計(jì),具備高靈敏度與高特異性。無錫梯度基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀(qPCR 儀)憑借其能夠在 PCR 擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因精細(xì)定量的特點(diǎn),在多個(gè)領(lǐng)域都有較廣且重要的應(yīng)用。qPCR的高靈敏度使其能對(duì)微量生物樣本(如血液、毛發(fā)、唾液、精斑等)進(jìn)行檢測(cè),在個(gè)體識(shí)別、親子鑒定等方面發(fā)揮重要作用。個(gè)體識(shí)別:通過擴(kuò)增樣本中特異性的短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)并定量分析,與已知樣本比對(duì),實(shí)現(xiàn)個(gè)體的精細(xì)識(shí)別,廣泛應(yīng)用于刑事案件偵破和災(zāi)難事故中的身份確認(rèn)。親子鑒定:基于親代與子代基因序列的遺傳規(guī)律,通過定量分析特定基因標(biāo)記的匹配程度,確定親子關(guān)系,結(jié)果準(zhǔn)確性可達(dá)99.99%以上。無錫梯度基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格