溫度與反應(yīng)體系控制溫度準(zhǔn)確性:定期校準(zhǔn)儀器(由專業(yè)人員進(jìn)行),確保變性、退火溫度精細(xì)(偏差超過 ±0.5℃會(huì)影響結(jié)果)。體系一致性:加樣時(shí)確保各孔反應(yīng)體積一致(誤差≤1μL),避免因體積差異導(dǎo)致 Ct 值偏差。避免氣泡:加樣后若有氣泡,需輕輕敲擊板壁或離心去除,否則氣泡會(huì)干擾熒光信號(hào)采集。3. 試劑與樣本處理酶的保存:qPCR Mix 需 - 20℃冷凍保存,使用時(shí)冰上融化,輕輕混勻(勿震蕩,防止酶變性)。模板質(zhì)量:避免模板中含 EDTA、SDS 等抑制劑,若樣本濃度過低,可適當(dāng)增加模板量(但需注意體積占比,避免影響反應(yīng)體系)。RePure系列PCR儀采用了梯度溫控技術(shù),能夠在實(shí)驗(yàn)中準(zhǔn)確調(diào)節(jié)溫度梯度,可以輕松地優(yōu)化PCR反應(yīng)條件。無錫QPCR基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格
準(zhǔn)備試劑:準(zhǔn)備 PCR 反應(yīng)所需的各種試劑,包括 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、緩沖液、引物、Mg2?等。引物是決定 PCR 特異性的關(guān)鍵因素,需根據(jù)待檢測的轉(zhuǎn)基因成分的特定基因序列設(shè)計(jì)合成特異性引物。配置反應(yīng)液:按照一定的比例和順序,將各種試劑加入到無菌的 PCR 管中,配置成 PCR 反應(yīng)體系。一般反應(yīng)體系包括 10×PCR 緩沖液、2.5mmol/L dNTPs、25mmol/L MgCl?、10μmol/L 引物、5U/μL Taq DNA 聚合酶以及適量的模板 DNA,總體積通常為 20μL 或 50μL。無錫QPCR基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格Q9604還具備先進(jìn)的溫控系統(tǒng),確保在每一個(gè)循環(huán)過程中保持均勻的溫度分布,確保PCR反應(yīng)的條件。
實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀(qPCR 儀)憑借其能夠在 PCR 擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào)變化,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因精細(xì)定量的特點(diǎn),在多個(gè)領(lǐng)域都有較廣且重要的應(yīng)用。qPCR的高靈敏度使其能對(duì)微量生物樣本(如血液、毛發(fā)、唾液、精斑等)進(jìn)行檢測,在個(gè)體識(shí)別、親子鑒定等方面發(fā)揮重要作用。個(gè)體識(shí)別:通過擴(kuò)增樣本中特異性的短串聯(lián)重復(fù)序列(STR)并定量分析,與已知樣本比對(duì),實(shí)現(xiàn)個(gè)體的精細(xì)識(shí)別,廣泛應(yīng)用于刑事案件偵破和災(zāi)難事故中的身份確認(rèn)。親子鑒定:基于親代與子代基因序列的遺傳規(guī)律,通過定量分析特定基因標(biāo)記的匹配程度,確定親子關(guān)系,結(jié)果準(zhǔn)確性可達(dá)99.99%以上。
儀器操作設(shè)置放置樣品板:將密封好的 96 孔板平穩(wěn)放入 qPCR 儀的樣品槽,確??孜粚?duì)齊,蓋緊儀器艙門。程序設(shè)置(通過儀器軟件):預(yù)變性:通常 95℃,30 秒 - 5 分鐘(熱啟動(dòng)酶,使模板完全變性)。循環(huán)階段(變性→退火→延伸,同時(shí)采集熒光):變性:95℃,5-15 秒(使 DNA 解鏈)。退火 / 延伸:根據(jù)引物 Tm 值設(shè)置溫度(一般 55-65℃),20-30 秒(引物結(jié)合并延伸,熒光染料 / 探針在此階段發(fā)光)。循環(huán)次數(shù):通常 35-40 次(根據(jù)模板濃度調(diào)整)。溶解曲線(可選):用于驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物特異性,程序?yàn)?95℃ 15 秒→60℃ 1 分鐘→緩慢升溫至 95℃,同時(shí)連續(xù)采集熒光(觀察是否有單一峰,排除非特異性擴(kuò)增或引物二聚體)。熒光通道選擇:根據(jù)使用的熒光染料 / 探針類型選擇(如 SYBR GreenⅠ 對(duì)應(yīng) FAM 通道,TaqMan 探針根據(jù)標(biāo)記熒光選擇)。樣本信息錄入:在軟件中標(biāo)記樣品類型(如標(biāo)準(zhǔn)品、未知樣本、陰性對(duì)照、空白對(duì)照)及孔位對(duì)應(yīng)關(guān)系。RePure-(D)B雙槽PCR是一款專業(yè)、高效的PCR儀器,具有雙槽設(shè)計(jì),可同時(shí)進(jìn)行兩組PCR反應(yīng),提高實(shí)驗(yàn)效率。
轉(zhuǎn)基因作物檢測應(yīng)用:擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因作物中的外源基因(如抗蟲基因Bt、抗除草劑基因EPSPS),用于安全性評(píng)估和監(jiān)管篩查。案例:歐盟法規(guī)要求對(duì)食品中的轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行 PCR 定性檢測。2. 作物育種與品種鑒定應(yīng)用:利用 SSR(簡單序列重復(fù))、AFLP(擴(kuò)增片段長度多態(tài)性)等分子標(biāo)記技術(shù),輔助選育抗病、抗逆品種,或鑒定種子純度。案例:通過 PCR 擴(kuò)增特定品種的特征性 DN**段,區(qū)分雜交種與常規(guī)種。3. 畜禽疫病檢測應(yīng)用:檢測動(dòng)物病原體(如非洲豬瘟病毒、禽流感病毒)的核酸,用于疫病防控和檢疫。RePure-A也體現(xiàn)出了優(yōu)勢,外殼設(shè)計(jì)采用高質(zhì)量材料,有效防止外部影響和環(huán)境因素對(duì)儀器運(yùn)行的潛在干擾。南京定性基因擴(kuò)增儀PCR儀品牌
RePure-A的技術(shù)實(shí)力在不斷更新,科研人員在復(fù)雜研究中能獲得可重復(fù)、可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),從而加快科研進(jìn)程。無錫QPCR基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格
PCR儀是利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),在體外對(duì)特定DNA片段進(jìn)行大量擴(kuò)增的儀器。其原理是通過高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。具體過程如下:高溫變性:將待擴(kuò)增的DNA雙鏈在高溫(90-95℃)下解鏈,形成單鏈DNA模板。低溫退火:降低溫度(一般為50-65℃),使引物與單鏈DNA模板特異性結(jié)合。適溫延伸:在DNA聚合酶的作用下,以引物為起始點(diǎn),在適宜溫度(一般為72℃左右)下,以dNTP為原料,沿著模板鏈合成新的DNA鏈。無錫QPCR基因擴(kuò)增儀PCR儀價(jià)格