在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 則是結(jié)合了高保真性和便捷性的理想選擇。這種預(yù)混液不僅繼承了Pfu DNA聚合酶的重要的保真性,還通過添加熒光染料,為實(shí)驗(yàn)提供了更直觀的監(jiān)測(cè)手段。Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,含有Pfu DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的熒光染料。Pfu DNA聚合酶以其高保真性著稱,其3'-5'外切酶活性能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。與普通Taq酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,使其成為基因克隆、突變分析和測(cè)序準(zhǔn)備等高精度實(shí)驗(yàn)的優(yōu)先工具。熒光染料的加入是該預(yù)混液的一大亮點(diǎn)。這種染料能夠在PCR過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的擴(kuò)增情況,通過熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化反映目標(biāo)基因的擴(kuò)增程度。實(shí)驗(yàn)人員無需額外添加染料或進(jìn)行復(fù)雜的后處理,即可直接在PCR儀上觀察擴(kuò)增曲線,從而實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確的定量分析。這種設(shè)計(jì)不僅節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,還減少了人為操作帶來的誤差。此外,Pfu Master Mix (2×) (With Dye) 的2倍濃度設(shè)計(jì)進(jìn)一步簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)人員只需加入模板DNA和引物,即可直接進(jìn)行反應(yīng),減少了手動(dòng)配制反應(yīng)體系的步驟和可能出現(xiàn)的誤差。
產(chǎn)品特點(diǎn)50× ROX Reference Dye的主要成分是高純度的5-ROX甘氨酸,其濃度為25 μM,以50倍濃縮的形式提供。這種染料的熒光強(qiáng)度在PCR過程中保持穩(wěn)定,不會(huì)因擴(kuò)增反應(yīng)而發(fā)生變化,因此可以作為理想的內(nèi)部參考信號(hào)。其激發(fā)波長(zhǎng)為575 nm,發(fā)射波長(zhǎng)為602 nm,與多數(shù)qPCR儀器的光學(xué)系統(tǒng)兼容。此外,ROX Reference Dye具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性,能夠在-20℃避光保存長(zhǎng)達(dá)2年,短期使用時(shí)可在4℃保存。這種穩(wěn)定性使其在實(shí)驗(yàn)中能夠提供一致的熒光信號(hào),減少因試劑變質(zhì)導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差。性能優(yōu)勢(shì)校正孔間誤差:qPCR實(shí)驗(yàn)中,由于加樣量、孔位置、試管壁厚度等因素,不同孔之間的熒光信號(hào)可能存在差異。50× ROX Reference Dye能夠通過校正這些非PCR相關(guān)的變化,顯著提高定量的精確度。提高數(shù)據(jù)重現(xiàn)性:通過使用ROX染料對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理,實(shí)驗(yàn)人員可以在較少的重復(fù)實(shí)驗(yàn)中獲得更精確的結(jié)果,從而節(jié)省時(shí)間和資源。適用于多種儀器:50× ROX Reference Dye兼容多種主流qPCR儀器,如ABI 5700、7000、Recombinant Mouse EGFR/HER1 Protein,His Tag在50 μL的反應(yīng)體系中,建議使用1.5 μL的5× PCR Enhancer(如果需要)和0.5 μL的Phusion DNA Polymerase。
Taq DNA聚合酶:分子生物學(xué)的“明星酶”Taq DNA聚合酶是一種從嗜熱菌Thermus aquaticus中分離得到的耐熱性DNA聚合酶,因其獨(dú)特的耐高溫特性和高效的DNA合成能力,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的工具。該酶在PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)中發(fā)揮著重要作用,極大地推動(dòng)了基因擴(kuò)增、測(cè)序和診斷技術(shù)的發(fā)展。Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,但缺乏3'→5'外切酶活性,這使得它在DNA合成過程中能夠快速延伸引物,同時(shí)在PCR產(chǎn)物的3'端添加一個(gè)突出的A堿基,便于后續(xù)的克隆操作。此外,Taq酶的耐熱性使其能夠在PCR的高溫變性步驟中保持穩(wěn)定,從而實(shí)現(xiàn)高效的循環(huán)擴(kuò)增。近年來,科學(xué)家們通過對(duì)Taq DNA聚合酶的改造和優(yōu)化,開發(fā)出多種突變體,以滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。例如,Klentaq1突變體具有更高的耐熱性和保真性,適用于長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增。此外,Taq酶的5'外切酶活性還被用于開發(fā)新型的多重PCR檢測(cè)技術(shù),如“MeltArray”技術(shù),實(shí)現(xiàn)了在單次反應(yīng)中檢測(cè)多個(gè)靶點(diǎn)。Taq DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用不僅極大地簡(jiǎn)化了DNA擴(kuò)增的流程,還為基因診斷、遺傳病檢測(cè)和個(gè)性化醫(yī)療等領(lǐng)域提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。
高靈敏度與特異性該試劑采用了優(yōu)化的反應(yīng)緩沖體系和抗體修飾的熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,能夠顯著提高擴(kuò)增效率和特異性。即使在低拷貝數(shù)的模板條件下,也能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定檢測(cè),例如某些產(chǎn)品可在3 copies/反應(yīng)的水平下實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定檢出。此外,該試劑還通過添加抑制非特異性擴(kuò)增的因子,進(jìn)一步提升了多重反應(yīng)的準(zhǔn)確性。2. 高效的多重檢測(cè)能力Multiplex Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus) 支持在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行多達(dá)四重的靶基因檢測(cè)。這種多重檢測(cè)能力極大地提高了實(shí)驗(yàn)效率,減少了樣本用量和檢測(cè)時(shí)間,特別適用于需要同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因或病原體的場(chǎng)景。3. 強(qiáng)大的防污染系統(tǒng)試劑中包含的dUTP/UDG系統(tǒng)能夠有效防止PCR產(chǎn)物的氣溶膠污染,從而避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。UDG酶在室溫下即可發(fā)揮作用,確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。4. 快速擴(kuò)增與操作簡(jiǎn)便該試劑支持快速擴(kuò)增程序,可在短時(shí)間內(nèi)完成qPCR反應(yīng),例如某些產(chǎn)品可在35分鐘內(nèi)完成45個(gè)循環(huán)。同時(shí),2×預(yù)混液的設(shè)計(jì)使得實(shí)驗(yàn)操作更加簡(jiǎn)便,只需加入模板、引物和探針即可進(jìn)行反應(yīng)。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I是TOPO克隆技術(shù)的關(guān)鍵組分,該技術(shù)允許快速、簡(jiǎn)便地將PCR產(chǎn)物克隆到質(zhì)粒載體中。
一、主要特點(diǎn):免提取與高兼容性Blood Direct PCR Master Mix (2×) (Without Dye)是一種專為血液樣本設(shè)計(jì)的高效PCR預(yù)混液,能夠直接從全血或干血斑中擴(kuò)增DNA,無需進(jìn)行繁瑣的DNA提取和純化步驟。這種預(yù)混液含有高保真DNA聚合酶(如HemoTaq?或Q5® Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase),這些酶經(jīng)過優(yōu)化,能夠耐受血液中的各種抑制劑,包括抗凝劑(如EDTA、肝素、檸檬酸鈉)和濾紙中的化學(xué)物質(zhì)。此外,該預(yù)混液還具備的模板兼容性,能夠從多種抗凝劑保存的血液樣本中直接擴(kuò)增DNA,適用于人類、小鼠等哺乳動(dòng)物的全血樣本。二、性能:高保真性與長(zhǎng)片段擴(kuò)增Blood Direct PCR Master Mix (2×) (Without Dye)的優(yōu)勢(shì)之一是其高保真性。其DNA聚合酶的保真性高于普通Taq酶,接近Pfu DNA聚合酶,能夠確保擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。這對(duì)于需要高精度的基因克隆和測(cè)序?qū)嶒?yàn)尤為重要。此外,該預(yù)混液能夠擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)5kb甚至更長(zhǎng)的DNA片段,適用于多種復(fù)雜的基因組分析。例如,它可以輕松擴(kuò)增人類基因組中的長(zhǎng)片段,如IL-6基因的4882bp片段。Cpf1是一種新發(fā)現(xiàn)的類2/型V CRISPR-Cas DNA內(nèi)切酶,在不同系統(tǒng)中顯示出一系列的活性。Recombinant Cynomolgus TPSAB1 protein,His Tag
將合成的gRNA與Cas9 NLS蛋白混合,形成復(fù)合物。由于Cas9 NLS蛋白兩端都有NLS,有助于復(fù)合物快速進(jìn)入細(xì)胞核。HIV gag peptide (199-207)
SYBR Green qPCR Mix (2×, Low ROX, UDG Plus):高效、特異且防污染的qPCR解決方案SYBR Green qPCR Mix (2×, Low ROX, UDG Plus) 是一種為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)設(shè)計(jì)的即用型預(yù)混液,結(jié)合了SYBR Green I熒光染料、低濃度ROX校正染料以及UDG防污染系統(tǒng),能夠?qū)崿F(xiàn)高效、特異且防污染的基因定量檢測(cè)。產(chǎn)品特點(diǎn)高特異性和靈敏度:采用熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,結(jié)合優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,有效減少非特異性擴(kuò)增,提高檢測(cè)靈敏度。低濃度ROX校正:含有低濃度ROX染料,適用于需要低濃度ROX作為校正染料的qPCR儀器,如ABI 7500、ViiA 7、QuantStudio系列等。UDG防污染系統(tǒng):預(yù)混液中包含UDG酶和dUTP,可在PCR反應(yīng)前降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,有效防止交叉污染。操作簡(jiǎn)便:2×預(yù)混液設(shè)計(jì),只需加入引物和模板即可進(jìn)行反應(yīng),減少了操作步驟和污染風(fēng)險(xiǎn)??焖俜磻?yīng):優(yōu)化的反應(yīng)體系支持快速qPCR程序,可在短時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),提高實(shí)驗(yàn)效率。應(yīng)用場(chǎng)景基因表達(dá)分析:用于定量檢測(cè)特定基因的表達(dá)水平。病原體檢測(cè):快速檢測(cè)病毒、細(xì)菌等病原體的DNA。SNP分型和拷貝數(shù)變異分析:通過qPCR實(shí)現(xiàn)高特異性的基因分型。多重qPCR:可在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因。HIV gag peptide (199-207)