無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),包括以下幾大類物質(zhì):1)促貼壁物質(zhì):一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對(duì)許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。2)促生長(zhǎng)因子:針對(duì)不同細(xì)胞添加不同的生長(zhǎng)因子。也是刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些是許多細(xì)胞必不可少的,如胰島素。3)酶抑制劑:培養(yǎng)貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中需含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制劑。4)結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。5)微量元素:硒是常見的。DMEM 含多種無機(jī)鹽,維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓與離子平衡 。安徽華晨陽細(xì)胞培養(yǎng)基
細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多,按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基(目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基),按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌,液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供,用戶可直接使用,非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有:氨基酸、碳水化合物、無機(jī)鹽、維生素及其它輔助物質(zhì):氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。因此,各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2周以上時(shí),還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長(zhǎng)主要能量來源,其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖和醋酸等。無機(jī)鹽培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。黑龍江細(xì)胞培養(yǎng)基源頭廠家M199含有獨(dú)特的成分,包括腺嘌呤、腺苷、次黃嘌呤、胸腺嘧啶、以及其他的維生素。
在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)踐中,選擇合適的 DMEM 培養(yǎng)基至關(guān)重要。對(duì)于生長(zhǎng)較快、粘附性低的細(xì)胞,如某些腫瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞,高糖型 DMEM 培養(yǎng)基是理想之選,其高濃度葡萄糖能充分滿足這類細(xì)胞對(duì)能量的高需求,促進(jìn)細(xì)胞快速生長(zhǎng)。而對(duì)于一些原代細(xì)胞,因其對(duì)培養(yǎng)環(huán)境更為敏感,可能需要低糖型 DMEM 培養(yǎng)基,并根據(jù)細(xì)胞來源和特性添加特定的生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑等,定制專屬培養(yǎng)方案,為原代細(xì)胞提供**適宜的生長(zhǎng)條件,提高原代細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。
在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)里,DMEM 培養(yǎng)基的使用過程需嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范。收到培養(yǎng)基后,應(yīng)及時(shí)存放于 2-8°C 的環(huán)境中,低溫可有效減緩培養(yǎng)基內(nèi)成分的降解速度,確保其營(yíng)養(yǎng)成分的穩(wěn)定性。在使用前,需將培養(yǎng)基預(yù)熱至 37°C,模擬人體體溫環(huán)境,讓細(xì)胞在適宜溫度下開啟生長(zhǎng)旅程。同時(shí),由于 DMEM 培養(yǎng)基多采用碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng),需將培養(yǎng)環(huán)境的 CO?濃度維持在 5 - 10%,以此精細(xì)調(diào)控培養(yǎng)基的 pH 值處于 7.2 - 7.4 的生理適宜區(qū)間,為細(xì)胞打造穩(wěn)定且舒適的 “居住空間”,促進(jìn)細(xì)胞健康生長(zhǎng)。MEM培養(yǎng)基含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素,主用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),修改后也可用于其他細(xì)胞培養(yǎng)。
DMEM,即 Dulbecco 改良的 Eagle 培養(yǎng)基,在細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域占據(jù)著極為重要的地位。它源于經(jīng)典的 Eagle 培養(yǎng)基,經(jīng)科學(xué)家 Dulbecco 改良優(yōu)化后,煥發(fā)出全新活力。DMEM 培養(yǎng)基成分豐富,氨基酸濃度是原始 Eagle 培養(yǎng)基的兩倍,還涵蓋了非必需氨基酸,為細(xì)胞蛋白質(zhì)合成筑牢根基。其維生素含量亦是 Eagle 培養(yǎng)基的四倍之多,積極參與細(xì)胞內(nèi)各類代謝反應(yīng),助力細(xì)胞維持正常生理功能。同時(shí),培養(yǎng)基中包含酸,這一糖酵解途徑的關(guān)鍵物質(zhì),在細(xì)胞能量供應(yīng)方面發(fā)揮著重要作用,時(shí)刻為細(xì)胞的生命活動(dòng)提供動(dòng)力支持。針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用,我們提供多種組分的 McCoy’s 5A改良培養(yǎng)基。浙江樣本細(xì)胞培養(yǎng)基供應(yīng)商
HeLa 細(xì)胞、Jurkat 細(xì)胞、 MCF-7 細(xì)胞、PC12 細(xì)胞、PBMC 細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和ai細(xì)胞,是使用的培養(yǎng)基之一。安徽華晨陽細(xì)胞培養(yǎng)基
干細(xì)胞研究同樣與 DMEM 培養(yǎng)基緊密相連。DMEM 培養(yǎng)基能夠?yàn)楦杉?xì)胞群體的維持和擴(kuò)增提供適宜環(huán)境。以胚胎干細(xì)胞為例,高糖型 DMEM 培養(yǎng)基憑借充足的能量供應(yīng),助力胚胎干細(xì)胞保持良好的生長(zhǎng)狀態(tài),維持其多能性。在誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為特定細(xì)胞類型時(shí),科研人員可根據(jù)需求對(duì) DMEM 培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,添加特定的生長(zhǎng)因子等成分,引導(dǎo)干細(xì)胞向目標(biāo)細(xì)胞分化。比如,在神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元細(xì)胞分化的研究中,通過調(diào)整 DMEM 培養(yǎng)基成分,促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的分化進(jìn)程,為神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。安徽華晨陽細(xì)胞培養(yǎng)基
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