8．取剩余裂解液測定LacZ的活性，其讀數(shù)作為內(nèi)標用以矯正熒光素酶的讀數(shù)。9.用矯正后的讀數(shù)作圖，分析數(shù)據(jù)。注：熒光素見光易氧化，已稀釋未用的熒光素應丟棄。注意事項：1．熒光素酶檢測試劑需在15-25℃條件下預平衡后再進行反應，而后依據(jù)具體條件進行自動或手動檢測。當用液閃計數(shù)儀時，加入熒光素酶檢測試劑后立即輕輕混勻。2．如果細胞裂解后不能立即對提取物進行檢測，樣品可以在冰上保存大約5h，在-70℃可保存數(shù)月。不要反復凍融以避免酶活性的降低。3．利用上述方法檢測冷的樣品時，其信號強度將下降5-15%。4．在熒光素酶活性較高的情況下，導致信號超出線性范圍（信號溢出）可用裂解液將樣品進行稀釋。5．不要儲存稀釋過的樣品。如果必須保存，要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為，這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性。6．一些熒光儀在進行檢測前需要1-2s的穩(wěn)定，因此建議在開機后過一段時間再進行檢測操作。熒光素酶報告基因檢測主要有哪些用途？a.啟動子結構分析，將啟動子區(qū)域序列（通常2k左右）進行分段截短，或對特定位點進行突變，再分別構建入luciferase報告載體，檢測其啟動子活性。b.啟動子SNP分析，一些基因的啟動子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性。做D-熒光素鉀鹽測試價格是多少。揚州D-熒光素鉀鹽活題成像原理
在食品衛(wèi)生領域由于ATP生物發(fā)光技術無需培養(yǎng)過程，操作簡便、靈敏度高，數(shù)分鐘內(nèi)可得到結果，具有其它微生物檢測方法無法比擬的優(yōu)勢，是目前檢測微生物更快的方法。熒光素是更受歡迎的多功能生物熒光底物之一。在螢火蟲和幾種其它甲蟲中發(fā)現(xiàn)了螢火蟲熒光酶/熒光素。通過中間體dioxetanone介導作用，熒光素酶氧化ATPji活的熒光素。螢火蟲熒光素酶在ATP的輔助下氧化熒光素產(chǎn)生熒光。這個反應發(fā)生的幾秒內(nèi)在560nm處的化學熒光達到更高峰，當熒光素和ATP都超量存在的條件下，發(fā)射光與熒光素酶的活性成比例關系。螢火蟲熒光素酶很早以前就用于與抗體結合形成偶聯(lián)物，作為免疫分析中用熒光素作為底物進行檢測的標簽。與HRP和堿性磷酸酶相比，熒光素酶不耐化學修飾。這個酶的一個特殊的優(yōu)點是，除了高靈敏度外，在哺乳動物組織中內(nèi)源性熒光素酶的活性很低。熒光素酶另一個重要的作用是用于衛(wèi)生監(jiān)測。熒光素酶/熒光素系統(tǒng)可用于檢測污染，因為產(chǎn)生熒光所需的ATP存在于所以活ti生物中。這種類型的ATP生物熒光特性足以保證對食品表面的檢測，無論是在加工制作工程中設備的污染還是產(chǎn)品的污染都能檢出。D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物。宿遷專業(yè)做D-熒光素鉀鹽濃度做D-熒光素鉀鹽測試真的靠譜嗎？
具體實驗流程：注：該操作流程通常用來檢測轉染了螢火蟲熒光素酶基因的真核細胞中熒光素酶表達的活性，不適用于對細菌熒光素酶進行檢測。1．實驗***天，消化并接種細胞（根據(jù)具體實驗選擇合適的細胞）于35mm細胞培養(yǎng)皿，置于5％CO2、飽和濕度的37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。2．等細胞密度達到70％時用Luciferase報告基因質粒、LacZ的表達質粒及其它質粒（根據(jù)具體實驗確定）共轉染細胞（根據(jù)具體實驗選擇轉染方法，如磷酸鈣沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．轉染24－36h后，吸取培養(yǎng)液，用預冷的PBS（無鈣和鎂離子）洗滌細胞。注：熒光酶的酶促反應會被痕量的鈣所抑制，故用磷酸鈣轉染的細胞在收集細胞前應充分洗滌除去含鈣介質。4．在每個培養(yǎng)皿中加入350μl預冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解細胞。5．在細胞裂解期間，準備足量的ml微量離心管，將ATPbuffer與luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等體積的細胞裂解液（100μl）至步驟5中的離心管中，迅速混勻，在發(fā)光儀（Luminometer）上讀取吸光值。注：發(fā)光反應會迅速衰減，將細胞裂解液加入反應液后5s內(nèi)必須讀取吸光值。7．確保以相同操作手法讀取全部樣品吸光值后。
而發(fā)出不同顏色的熒光。螢火蟲有2000多種，而叩甲總科（包括螢火蟲、叩頭蟲和相關昆蟲）則有更多，因此它們的熒光素酶對于分子系統(tǒng)學研究很有用。目前研究得更透徹的熒光素酶是來自Photinini族螢火蟲中的北美螢火蟲（Photinuspyralis）。熒光素酶報告基因（Luc）是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。熒光素酶是能夠催化不同底物氧化發(fā)光的一類酶，哺乳細胞無內(nèi)源性熒光素酶。更常用的熒光素酶有細菌熒光素酶、螢火蟲熒光素酶和Renilla熒光素酶。細菌熒光素酶對熱敏感，因此在哺乳細胞的應用中受到限制。螢火蟲熒光素酶靈敏度高，檢測線性范圍寬達7～8個數(shù)量級，是更常用于哺乳細胞的報道基因，用熒光比色計即可檢測酶活性，因而適用于高通量篩選。隨著具有膜通透性和光裂解作用的螢火蟲熒光素酶的應用，無需裂解細胞即可檢測酶活性。Renilla熒光素酶催化腸腔（coelenterazine）氧化，產(chǎn)物可透過生物膜，可能是更適用于活細胞的報告分子。將熒光素酶報告基因載體轉染到細胞中。D-熒光素鉀鹽長期保存條件是-20℃干燥避光。
D-熒光素鉀鹽是一種化學品。中文別名:(S)-4,5-二氫-2-(6-羥基苯并噻唑-2-基)噻唑-4-甲酸鉀鹽英文別名:(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazol-2-yl)thiazole-4-carboxylicacidpotassiumsalt產(chǎn)品描述D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍應用于整個生物技術領域，特別是體內(nèi)活題成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素底物能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的慢病毒轉染入細胞后構建穩(wěn)定表達細胞株，構建原位腫大的瘤模型，之后注入熒光素底物，通過IVIS系統(tǒng)來檢測光強度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或進行藥物藥效評價等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。注：在抗腫大的瘤藥物藥效評價試驗中，由于生物自發(fā)光檢測需要根據(jù)熒光素表達標定腫大的瘤大小，受腫大的瘤生長所發(fā)生的腫大的瘤內(nèi)部壞死影響，生物自發(fā)光并不能很覆蓋面廣的評價腫大的瘤生長，在抗腫大的瘤藥效評價有較高要求的實驗中，建議使用小動物核磁成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長。D-熒光素也常用于體外研究。D-熒光素鉀鹽測試需要哪些必備條件？鹽城螢火蟲熒光素酶D-熒光素鉀鹽公司
D-熒光素鉀鹽的活題成像技術。揚州D-熒光素鉀鹽活題成像原理
可運用熒光素酶報告系統(tǒng)分析其相對活性。c.驗證特定轉錄因子同其調控序列的作用，將該序列（通常為啟動子區(qū)域）插入報告基因載體，同時在實驗細胞***轉過表達該轉錄因子，可分析轉錄因子過表達是否提高熒光素酶活性。d.可以分析信號通路是否***，將該信號通路的下游響應原件序列構建入報告基因載體，在不同上游信號條件下，熒光素酶活性**了通路的下游響應。例如在GPCR研究中，將cAMPresponseelement（CRE）載入報告基因載體，構建穩(wěn)定表達細胞株后，可以用于分析GPRC的***與6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd篩選。又如，將HIF1α的響應原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase報告載體構建穩(wěn)轉細胞株，可以用于低氧相關通路的研究。e.驗證microRNA的靶序列，將待測的3’UTR序列插入報告基因載體，再共轉入該microRNA，如果熒光素酶活性下降，則提示為其靶序列。Q：在[信諾金達]做熒光素酶報告基因檢測，需要提供什么？實驗結果包括哪些？您需要提供：1.基因序列或模板，需提供詳細的轉錄因子、目的基因或microRNA信息；2.實驗細胞，[信諾金達]默認為使用293T細胞，實驗結束后，[信諾金達]會為您提供實驗流程及完整報告一份，包括實驗原始數(shù)據(jù)、圖片、分析結果等。揚州D-熒光素鉀鹽活題成像原理
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