室溫培育30min后加入細胞孔板中，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。2)單克隆細胞篩選轉染24h后胰酶消化細胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時加入實驗確定的濃度G418，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細胞抗性克隆的出現。分別挑選單一抗性克隆至96孔板，待其逐漸增殖后轉入24孔板中繼續(xù)傳代培養(yǎng)。3)熒光素酶活性鑒定陽性克隆單一抗性克隆傳代至第五代時用LuciferaseAs-sayAystem檢測熒光素酶活性。檢測時，各克隆按1×105個/孔接種到24孔板，24h后細胞裂解液裂解12000rpm，4℃離心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl熒光素酶96microplateluminometer連續(xù)讀底物，停留2s后，取10s的熒光值（RLU），每個克隆設3個復孔，保留RLU值高的細胞克隆繼續(xù)傳代培養(yǎng)，再過5代后進行熒光素酶活性檢測。保留RLU值維持較高的克隆直至第30代，熒光素酶活性更高的幾個克隆MCF-7-luc即為陽性克隆.各不同數量細胞克隆的熒光值檢測7-luc陽性克隆細胞按細胞數將篩出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分別接種到96孔黑板中，另外一組只有細胞，一組只有培養(yǎng)基作對照，設置2個復孔，常規(guī)培去上清并用PBS洗兩次。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽測試價格。ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
但是上一次底物的殘留曲線可以知道，可以控制對下一次觀察結果的影響。儲存與運輸一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運輸放在4℃環(huán)境。建議現用現配，D熒光素鉀鹽在液體中容易降解。應用領域腫大的瘤，干細胞，藥物開發(fā)，基因治的好，轉基因小鼠，免疫學等等。英文名字firefly.中文名稱熒光素酶，重組熒光素貨號AAT-12500規(guī)格￥1430/1mL背景資料：熒光素酶是來自北美螢火蟲（Photinuspyralis）中熒光素酶基因的克隆和重組表達，它為實驗研究或者用生物熒光試劑制備試劑盒檢測ATP或者熒光素底物提供了可信度和可靠性。這種重組酶可以克服由天然資源純化獲得熒光素酶時受季節(jié)和地方區(qū)域變化的影響。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)，可通過熒光測定儀設備測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光，常應用于啟動子轉錄活性調控及miRNA靶基因驗證等方向研究。產品形式提供的熒光素酶*重組熒光素*產品為溶液形式。作者：思存鏈接：zhuanlan./p/來源：知乎著作權歸作者所有。商業(yè)轉載請聯系作者獲得授權，非商業(yè)轉載請注明出處。鹽城熒光素D-熒光素鉀鹽應用南京地區(qū)有哪些做D-熒光素鉀鹽測試的公司。
Q：熒光素酶作為報告基因相比于熒光蛋白有哪些優(yōu)勢？Luciferase的靈敏度相比于GFP提高10-100倍以上，同時具有更寬的動態(tài)范圍，便于數值分析比較，不需要熒光顯微鏡，而且在***實驗中其熒光穿透性高于EGFP等熒光蛋白，同時由于沒有內源活性、其本底信號很低。而GFP等熒光蛋白相比于熒光素酶的優(yōu)勢在于可以進行失蹤定位，并且其觀測不需裂解細胞，方便進行適時觀察。Q：海腎熒光素酶和螢火蟲熒光素酶相比，相對活性如何？在氧、鎂和ATP的存在下，螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲熒光素，而來源于海洋腔腸（Renillareniformis)的熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。雙報告基因技術（Dual-reporterassays）,結合了螢火蟲熒光素酶測試和海腎熒光素酶測試。Q：雙熒光素酶報告基因實驗轉染效率很低而且復孔重復不出來是什么原因？轉染效率低的話可以從三個方面改善，首先要確保細胞狀態(tài)是好的，通常我們選出處于分裂期的細胞，另外陽性對照您可以選擇過表達的熒光蛋白質粒，還有就是DNA的質量尤為重要，更好是先酶切驗證。這個實驗檢測結果很靈敏，有一定差異是正常的，通常只要確保它在一個數量級之內即可。如果差異超出這個范圍可以從兩方面改善，一是記住保持樣本的均一性。
故根據熒光反應的情況可以檢測樣品中的微生物含量。APT熒光檢測儀***用于食品、飲用水、餐飲器具等的微生物快速檢測。1970年，科學家***次測定了螢火蟲熒光素酶的結構；1985年，科學家***克隆了一種螢火蟲熒光素酶基因，并在大腸桿菌中表達，從而得到了具有活性的熒光素酶；1986年，科學家們測定了該種螢火蟲熒光素酶的基因序列。隨后，各種螢火蟲熒光素酶基因相繼克隆成功，熒光素酶的研究和應用不斷發(fā)展。目前，熒光素酶發(fā)光系統(tǒng)的分析技術已經廣泛應用到醫(yī)學、生命科學、環(huán)境科學、微生物學等許多領域。以醫(yī)學領域為例，專家們將熒光素酶基因嵌入到*細胞中，再注入熒光素，使*細胞發(fā)光，通過探測熒光，就能監(jiān)測*細胞的擴散和轉移。同理，用這種方法能對致病基因、***免疫機制等進行研究，對某些疾病進行診斷，監(jiān)測疫苗、藥物和治療方法的效力。南京翌科生物科技有限公司D-熒光素鉀鹽比較靠譜。
螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號分子，可以用來標記腫瘤細胞.一．細胞方法將帶有熒光素luc轉酶報告基因的真核表達重組質粒pRc/CMV2-7，利用G418篩選，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達熒光素酶基因的細胞克隆MCF-7體外評價其發(fā)光能力。通過建立裸鼠移植瘤模型，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測腫大的瘤生長及轉移情況，為下一步監(jiān)測裸鼠移植瘤對藥物作用的變化情從而為分析藥物對腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml設置6個濃度梯度。在細胞接種24h后，加入6孔板中，每個濃度設2個孔在10～14d內全部死亡。每天觀察細胞生長情況，死亡更低的G418濃度，即為篩選質粒轉染克隆MCF－7細胞的濃度。1)細胞轉染取對數生長期的MCF－7細胞，將細胞接種于6孔板內待細胞融合度達到80%～90%孔培養(yǎng)板中，TM即可轉染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進行轉染。在250μl無血清、無雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無血清、無雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000，室溫培育5min。將上述2種稀釋液混勻。D-熒光素鉀鹽母液保存條件是-20℃避光。ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
D-熒光素鉀鹽的激發(fā)波長是多長？ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
這是一種小分子（19kDa）單體酶，具有獨特的底物，其靈敏度比已具備高靈敏度的螢火蟲或海腎螢光素酶系統(tǒng)高約100倍。這種新型的報告基因有著***的應用前景，為進一步的技術開發(fā)奠定了基礎。[1]2015NanoBRET?技術NanoLuc?的小體積和非常明亮的光輸出是作為蛋白質標簽的理想特征。這些特征還很適合作為生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）的供體。一項針對各種能量受體熒光基團的深入研究發(fā)現，紅色光譜中的可選擇性有助于消除與BRET測定相關的一些挑戰(zhàn)?？蓪⑦@些熒光基團添加到蛋白質配基等分子中以測量靶蛋白的結合，或與HaloTag?配基耦聯以進行活細胞中蛋白質：蛋白質相互作用的檢測。[1]2016NanoBiT?技術隨著NanoLuc?的誕生，Promega的科學家努力將該報告基因改造為多亞基系統(tǒng)，即“NanoLuc?BinaryTechnology”或NanoBiT?。該系統(tǒng)由兩部分組成：11個氨基酸的小標簽和一個更大，更精細的NanoLuc?亞基，LgBiT。這兩部分結構互補結合，重組為一個明亮的螢光素酶。這些亞基的親和力可以和SmBiT肽一樣低，從而可以進行蛋白質相互作用的測定；也可以和HiBiT一樣高，從而允許自我組裝。[1]2017HiBiT?技術基于NanoBiT?系統(tǒng)的研究。ATPD-熒光素鉀鹽活題成像
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