源于病毒的載體系統(tǒng)作為基因遞送工具已經(jīng)在基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域應(yīng)用了多年。已經(jīng)有多種類型的病毒載體類型可以選擇使用,其中,基因和細(xì)胞zhi liao領(lǐng)域zui常使用的是慢病毒(LV)、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒(GRV)、腺病毒(AV)以及腺相關(guān)病毒(AAV)。分別源于小鼠白血病病毒和HIV的γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(GRVV)和慢病毒載體(LVV)是zui常使用的兩種逆轉(zhuǎn)錄病毒。針對(duì)特定的應(yīng)用選擇病毒載體系統(tǒng)時(shí)需要考慮的主要因素包括zhi liao性GOI(目的基因)的負(fù)載量(插入大?。?、免疫原性、細(xì)胞趨向性和被靶細(xì)胞攝取的效率、基因表達(dá)的持續(xù)時(shí)間以及規(guī)?;a(chǎn)的簡(jiǎn)單性。Thomas等曾總結(jié)介紹過不同的病毒載體系統(tǒng),整合vs非整合、囊膜vs無囊膜、病毒DNA基因組vs病毒RNA。此外,Patel等強(qiáng)調(diào)過每種系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì),每種載體系統(tǒng)從其各自的特性來說都是獨(dú)yi無er的,這也使其可能適合某些應(yīng)用,而不適合另一些應(yīng)用。中喬新舟可供應(yīng)品質(zhì)試劑盒 歡迎咨詢。熒光標(biāo)記試劑盒
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)是一種快速檢測(cè)臨床和實(shí)驗(yàn)樣品中蛋白質(zhì)含量的方法,根據(jù)研究需求,有許多方式可供選擇,如直接ELISA,間接ELISA,競(jìng)爭(zhēng)性ELISA和夾心ELISA等。ELISA是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的一種技術(shù),其具有快速、易于操作等優(yōu)點(diǎn),但當(dāng)條件不合適時(shí),其往往不能給出zui佳的結(jié)果,不能保持一致性和可復(fù)制性。
ELISA是Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay的簡(jiǎn)稱,即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,是研究蛋白抗體的重要方法。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶進(jìn)行直接或間接結(jié)合,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),進(jìn)行定性和定量分析。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了該方法用于IgG定量測(cè)定的文章,使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。
ELISA大致分為五種類型:直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法、捕獲包被法。
LUC示蹤試劑盒中所使用的熒光探針具有極低細(xì)胞毒性和無生物活性的特點(diǎn)。
在酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)操作中,加樣是必不可少的項(xiàng)步驟,這步驟在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中都有著很大的影響。那么酶聯(lián)免疫加樣步驟問題應(yīng)如何解決處理呢?
一、加樣問題的可能原因
1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;
2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱等待時(shí)間過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));
3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
二、解決方法
1.標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè),可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2.加樣后及時(shí)放入孵箱。
3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5.標(biāo)本較多時(shí),請(qǐng)分批操作。
小建議:在整個(gè)操作過程中必須保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸,實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化,有效提高檢測(cè)質(zhì)量。
ELISA試劑盒門檻較,制假相對(duì)簡(jiǎn)單,常有不法商家打著種屬全、指標(biāo)全、現(xiàn)貨供應(yīng)的旗號(hào)來生產(chǎn)、銷售假冒ELISA試劑盒,曾有老師吐槽“每個(gè)月都能收到好幾個(gè)從未聽過的廠商向我推銷ELISA試劑盒”。針對(duì)ELISA試劑盒真假問題,我們整理了一些辨別經(jīng)驗(yàn)(購(gòu)買前and購(gòu)買后),希望對(duì)大家有所幫助。體外診斷試劑(in vitro diagnosis regengts)是用于完成一個(gè)特定體外診斷檢驗(yàn),而包裝在一起的一組組分。試劑盒組分包括抗體、酶、緩沖液、稀釋液、校準(zhǔn)物、控制物或其它物品和材料。 做細(xì)胞遷移和侵襲、細(xì)胞黏附、細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性等實(shí)驗(yàn)時(shí),想監(jiān)測(cè)細(xì)胞變化,能看到細(xì)胞遷移的整個(gè)過程。
細(xì)胞毒性是由合成化合物、細(xì)胞自然產(chǎn)生毒性或免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞,自然殺傷細(xì)胞等)引起的細(xì)胞殺傷事件。目前主要通過對(duì)受損細(xì)胞釋放的相關(guān)底物(如乳酸脫氫酶-LDH)進(jìn)行定量,從而判斷細(xì)胞膜的受損情況。本期,將為大家講解有關(guān)細(xì)胞毒性的檢測(cè)產(chǎn)品、原理及特點(diǎn)等內(nèi)容。
細(xì)胞增殖及毒性檢測(cè)是生物相容性測(cè)試的一種,檢測(cè)藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況,即通過檢測(cè)材料或者藥物對(duì)細(xì)胞的增殖或者生長(zhǎng)的影響,來評(píng)價(jià)藥物或材料的毒性或者活性,主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、抗腫liu藥效測(cè)定等;常用MTT法或者CCK-8法檢測(cè),另外也可以通過Live/dead雙染法進(jìn)行細(xì)胞成像,更直觀的記錄細(xì)胞的存活情況。 ELISA即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等載體上進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法。熒光標(biāo)記試劑盒
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注意:結(jié)構(gòu)活性不佳的IL-6蛋白可能不容易被本試劑盒檢出,例如原核重組表達(dá)的IL-6蛋白可能無法被試劑盒檢出。組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。 熒光標(biāo)記試劑盒
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1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞專用低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。