重慶熒光顯微鈣成像動物行為學

鈣成像具有以下幾個優(yōu)勢：1.非侵入性：鈣成像技術可以在活物細胞或組織中進行觀察，無需破壞細胞或組織的完整性，因此是一種非侵入性的技術。2.高時空分辨率：鈣成像技術可以實時觀察細胞內鈣離子的動態(tài)變化，具有較高的時空分辨率?？梢圆蹲降解}離子濃度的瞬時變化，揭示細胞內信號傳導的快速過程。3.多樣性：鈣成像技術可以使用不同的熒光探針或基因工程技術，實現(xiàn)對不同類型的細胞或組織進行鈣成像?？梢愿鶕?jù)需要選擇適合的探針或方法，擴展應用范圍。4.可定量分析：通過鈣成像技術可以獲得熒光信號的強度，可以進行定量分析，了解鈣離子濃度的變化程度?？梢酝ㄟ^比較不同條件下的鈣成像結果，研究因素對鈣離子信號的調控作用。5.可應用于多個領域：鈣成像技術廣泛應用于神經(jīng)科學、細胞生物學、藥理學等領域?？梢匝芯可窠?jīng)元活動、細胞信號傳導、細胞凋亡等生物過程，有助于揭示生物學機制和疾病發(fā)生及發(fā)展的過程。綜上所述，鈣成像技術具有非侵入性、高時空分辨率、多樣性、可定量分析和廣泛應用于多個領域等優(yōu)勢，成為研究細胞內鈣離子動態(tài)變化的重要工具?？梢詫ι畈磕X區(qū)、皮層區(qū)域等大部分腦區(qū)進行鈣成像使用鈣離子指示蛋白。重慶熒光顯微鈣成像動物行為學

Anderson研究團隊發(fā)現(xiàn)實驗室雄性小鼠對雌性和雄性的攀爬行為可以通過是否存在超聲發(fā)聲（USV）來區(qū)分。這些和更多的行為數(shù)據(jù)表明，大多數(shù)雄性主導的攀爬是攻擊性的，盡管在極少數(shù)情況下可能是性行為。研究人員調查了USV+和USV-攀爬是否使用相同或不同的下丘腦神經(jīng)基質。通過使用Inscopix自由行為顯微鈣成像方法觀察內側視前區(qū)（MPOA）或腹內側下丘腦腹側細分（VMHvl）中雌jisu受體1(ESR1)陽性神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)在小鼠活動中可以解碼出在USV+和USV-攀爬過程中神經(jīng)元活動的獨特模式。交叉光遺傳刺激表達ESR1和囊狀GABA轉運蛋白（VGAT）的MPOA神經(jīng)元，可促進USV+攀爬，并將雄性的定向攻擊轉換為USV攀爬。南京inscopix鈣成像采購信息鈣成像技術在神經(jīng)科學研究中的應用。

在神經(jīng)系統(tǒng)研究中，我們常使用鈣指示劑表征鈣離子濃度變化，以反映神經(jīng)元的活動。常見的鈣成像方法有雙光子熒光成像和單光子熒光成像兩種，其中后者是研究腦神經(jīng)活動的常用方法。但與雙光子成像相比，單光子成像更易受到來自神經(jīng)元的高水平串擾，導致信噪比降低。不僅如此，采集活動信號時還易被來自近距離通過的軸突和樹突的信號所污染，造成的非特異性信號，這些均嚴重影響對神經(jīng)元活動反應的精細成像。因而，在單光子熒光成像的基礎上，研究團隊在細胞核中表達遺傳編碼的鈣指示劑，從而消除神經(jīng)纖維信號。但與經(jīng)典的胞質鈣成像相比，鈣進入細胞核的要求降低了這種成像的時間精度。

細胞內鈣離子作為重要的信號分子其作用具有時間性和空間性。當di1個細胞興奮時，產(chǎn)生了一個電沖動，此時，細胞外的鈣離子流入該細胞內，促使該細胞分泌神經(jīng)遞質，神經(jīng)遞質與相鄰的下一級神經(jīng)細胞膜上的蛋白分子結合，促使這一級神經(jīng)細胞產(chǎn)生新的電沖動。以此類推，神經(jīng)信號便一級一級地傳遞下去，從而構成復雜的信號體系，*終形成學習、記憶等大腦的高級功能。在哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中，鈣離子同樣扮演著重要的信號分子的角色。靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內鈣離子濃度約為50-100nM，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質的過程必不可少。眾所周知，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞質內鈣離子濃度由鈣離子的內外流平衡所決定，同時也受鈣結合蛋白的影響。細胞外鈣離子內流的方式有很多種，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來，以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑，將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來。

哺乳動物進入睡眠后神經(jīng)元活動發(fā)生了戲劇性的變化，覺醒的神經(jīng)元活動被認為會增加睡眠需求。其他腦細胞(膠質細胞)在自然睡眠-覺醒周期中的變化以及它們在睡眠調節(jié)中的作用相對來說還沒有被研究過。華盛頓州立大學ElsonS.Floyd醫(yī)學院生物醫(yī)學系的MarcosG.Frank研究團隊于2020年9月24日在CurrentBiology上發(fā)表論文“ARoleforAstroglialCalciuminMammalianSleepandSleepRegulation”，通過使用滔博生物-Inscopix自由活動鈣成像顯微鏡發(fā)現(xiàn)額葉皮層的星形膠質細胞鈣濃度隨睡眠和清醒而變化，會在睡眠剝奪后改變，并調節(jié)睡眠需求。通過鈣成像技術檢測活動動物記錄神經(jīng)元的活動。上海在體鈣成像聯(lián)系方式

雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展，使在實驗動物處于活動狀態(tài)下的鈣成像技術取得了飛速進展。重慶熒光顯微鈣成像動物行為學

紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針Fura-2和Indo-1都是紫外光激發(fā)的雙波長Ca2+熒光指示劑，也是目前較常用的比率型鈣離子熒光探針。與其他代的熒光指示劑相比，它們的熒光信號更強，對Ca2+的選擇性也更強。比率指示劑會在與Ca2+結合后會改變吸收/發(fā)射特性。以雙波長激發(fā)指示劑Fura-2為例。如圖2所示，低Ca2+濃度下，F(xiàn)ura-2在~380nm處激發(fā)，高Ca2+濃度下，在~340nm處激發(fā)。光譜由兩個峰組成：左側較短波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而增大，右側較長波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而減小。通過340/380nm交替激發(fā)，獲取在510nm處對應的發(fā)射光熒光強度的比率，就可以對Ca2+濃度進行定量的測量。因為Fura-2結果準確，且不易被漂白，所以得到了普遍使用。重慶熒光顯微鈣成像動物行為學