CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞.浙江cck8細胞增殖實驗原理
CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。上海cck8計算該方法已被***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選以及藥敏試驗等。
在做每個東西之前，都要搞清楚這個東西是什么。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數(shù)的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖相關的實驗都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中，**主要的化學藥品是WST-8，化學名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團和MTT是一樣的，是MTT的升級版本。在電子耦合試劑（也就是細胞是活的，有呼吸，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)。活細胞越多，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會越深（如圖1，來自于Sigma）。
實驗材料及試劑
96 孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。
實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中，每組設置8個復孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉染相應質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后，用酶標儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復 3 次， 取實驗結果的平均值作為**終實驗結果。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD] ×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長***率柱狀圖。 那它的用途也就大致可以猜到，和細胞增殖、細胞毒性相關的實驗都可以。
CKK-8原理
CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比。
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酚紅和血清對CCK法的檢測不會造成干擾；浙江cck8細胞增殖實驗原理
。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。金屬對CCK-8顯色有影響：當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10 mM的話，將會*****。懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。浙江cck8細胞增殖實驗原理