將膠質瘤干細胞(3105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉染進膠質瘤干細胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結果發(fā)現(xiàn)DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以產生轉染混合物。然后將混合物加入DMEM(siRNA濃度:50nM)中,與原代小膠質細胞培養(yǎng)48h。RT-PCR和westernblot分析檢測轉染效率。結果發(fā)現(xiàn)轉染TREM-1siRNA后******了OGD誘導的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上調。將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合.轉染試劑選購
LNCap細胞的培養(yǎng)和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進行,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共轉染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產制造商的科學實驗步驟進行轉染。轉染24小時后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉染達到95%的細胞融合。轉染48小時后,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率。體內轉染試劑盒在經過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。
在選擇轉染方法時,需考慮您希望輸送的運載物(DNA、RNA或蛋白質)以及您希望轉染的細胞類型。您可通過下表選擇各類陽離子脂質體轉染試劑和Neon轉染系統(tǒng)。我們提供了各種DNA、siRNA、寡核苷酸和RNA輸送選擇,讓您可以對自己的結果更加自信.***的輸送效果—可轉染多種類型的細胞無毒性作用—您之所以能看到結果,是因為核酸存在,而不是因為試劑需要的優(yōu)化工作更少—針對大多數(shù)細胞類型提供了快速、簡便的實驗方案連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理。但由于此類細胞經歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內狀態(tài)。
十全十美難,十全九美卻可以通過選擇一款好的轉染試劑來實現(xiàn)。理想的轉染試劑包括要具有較高的轉染效率,細胞毒性低,操作簡單可重復,價格還要可愛?,F(xiàn)在大多數(shù)實驗室用的是脂質體系列轉染試劑,但脂質體對細胞毒性大,某些細胞的轉染效率還很低,看單孔的價格也很不美好。尤其是在轉染RNA方面,脂質體的劣勢較明顯。QIAGEN在轉染試劑領域的研發(fā)思路與其核酸純化領域的精而專,全而深不同。在轉染試劑的研發(fā)過程中,另辟蹊徑,研精致思進而做到小而美的轉染產品。從市面上眾多轉染試劑的一片紅海中,神奇的開辟出一塊藍海,為客戶烹制出了幾款高效、快速、低毒又親民的轉染試劑私房菜。世界上低價的細胞轉染試劑PEI,這里有**詳細的操作步驟!
基于陽離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質體轉染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑,不局限于單一成分,混合了不同配方的脂類(非脂質體)、加上蛋白質組分、以及各種的成分,兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢,且操作更加簡單,易于高通量。原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖.上海非脂質體轉染試劑分裝
采用Lipofectamine RNAiMAX轉染試劑轉染A549細胞時,實現(xiàn)了比較好的基因***效果和比較低的細胞毒性。轉染試劑選購
Polysciences的高純度單體和聚合物產品在醫(yī)療器械中有許多應用,并不斷開發(fā)和增強其性能。公司秉承為應用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產品。質量保證1、遵循ISO13485質量管理認證獲得美國FDA有效注冊遵守良好生產規(guī)范(cGMP)獲得管理系統(tǒng)CSMS認證特種化學行業(yè)公認的代言人功能強大、經濟實惠、安全可靠這么好的轉染試劑,難道你不心動嗎?華雅思創(chuàng)生物經營品牌經過幾年的不懈努力,華雅思創(chuàng)生物提供的產品覆蓋免疫細胞***、干細胞***、干細胞基礎研究、動物模型疾病研究、基因檢測(NGS)、試管嬰兒、產品質控等諸多熱點科學研究領域。如今,華雅思創(chuàng)已經成為Lifeline、Takara、轉染試劑選購
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