細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結合流式的雙標準來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對照組和實驗組中，生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比.上海cck8檢測細胞增殖步驟
實驗材料及試劑96孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。實驗內容取生長狀態(tài)良好的對數生長期細胞，每孔按4×103個接種至96孔板中，每組設置8個復孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉染相應質粒后。繼續(xù)培養(yǎng)48h后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，用酶標儀測波長為450nm的OD值。實驗重復3次，取實驗結果的平均值作為**終實驗結果。按公式計算生長***率＝[(對照組OD－實驗組OD)/對照組OD]×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長上海cck8同仁在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.
CCK法的操作步驟（更多內容請見說明書）：實驗一：細胞活性檢測1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。5、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。
CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。6、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發(fā)生變化。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。
cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。
再說一下關于種板設置問題。眾所周知周圍一圈孔因為邊緣效應都是不用來做實驗的。一般每組樣品我會設置6個復孔，得到的OD值去掉**大值與**小值，其余取平均值。我用的是排***，會省很多力氣，但是也會增大組內誤差。這個只有通過校正移液***和選用**適***頭了。
能力有限，表達不清的大家湊合著看看吧。有疑問的歡迎大家留言討論，我們的目標是共同進步，哈哈。 加入CCK8那會空白對照組的細胞剛好長滿嗎？上海cck8和mtt哪個更好
CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8，也就是進行細胞計數的一個盒子。上海cck8檢測細胞增殖步驟
培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應，產生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，上海cck8檢測細胞增殖步驟