湖北凱基cck8

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-05-24

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測定的影響:不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,(主要是氨基酸的成分及糖含量),會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,因此所用培養(yǎng)基要一致,不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93;1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,會(huì)增加空白吸收,但不影響測定,扣除空白吸收即可,可見空白孔非常重要,所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外,血清不影響測定。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí),多加了這個(gè)***劑的濃度,向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。湖北凱基cck8

特點(diǎn)不同1、CellCountingKit-8:靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好;操作簡便,省時(shí)省力;水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細(xì)胞;無需放射性同位素和有機(jī)溶劑,對(duì)細(xì)胞毒性低;適合于高通量***篩選。2、MTT法:特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。三、應(yīng)用不同1、CellCountingKit-8:主要用途為***篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、**藥敏試驗(yàn)。2、MTT法:***用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗*****篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測定等。上海mtt與cck8的區(qū)別細(xì)胞增殖與毒性檢測實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 法.

貼壁生長的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長24h了,這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全,而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實(shí)驗(yàn)吧。3、加藥后的孵育時(shí)間,我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,24h,48h,72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性(RSD)、OD值的范圍(1.0左右)這些來選擇比較好的時(shí)間。太長了就沒有必要了,細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量,說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個(gè)問題:假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升,cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致。本人**終采用的是后者。5、cck8試劑加入后孵育時(shí)間,隨著時(shí)間的增加,OD值就會(huì)增大??傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長的測定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長的影響,基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以,***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,設(shè)置對(duì)照組(細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基)、實(shí)驗(yàn)組和空白組(無血清培養(yǎng)基),可以采用如下圖的排版方式:2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,代謝率低了以后,細(xì)胞呼吸減弱,NAD+產(chǎn)生減少,測出的Formazan也會(huì)減少。

五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):·若暫時(shí)不測定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí),貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測原理.北京cck8細(xì)胞

MTT與CCK8區(qū)別是什么?湖北凱基cck8

細(xì)菌***對(duì)CCK8檢測的影響:我們做***的,經(jīng)常會(huì)做到細(xì)菌或***對(duì)細(xì)胞的影響。那這種情況下我們應(yīng)該怎么辦。其實(shí)細(xì)菌防御系統(tǒng)還是非常強(qiáng)大,單獨(dú)和CCK-8在一起孵育時(shí),不會(huì)發(fā)生還原反應(yīng),幾乎不會(huì)和細(xì)菌發(fā)生顯色反應(yīng)。而細(xì)菌不需要入胞繁殖,所以結(jié)果還是可信的。**討厭的就是***,我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的,而且需要借助細(xì)胞的東西來進(jìn)行繁殖。繁殖過程中就需要消耗宿主的能量,會(huì)產(chǎn)生氧化還原反應(yīng),所以我用CCK-8來測定***對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)***復(fù)制的影響時(shí),我都小心翼翼的測很多個(gè)時(shí)間點(diǎn),說實(shí)話,效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北凱基cck8