圖3. 用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine 3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進行孵育(30min)、稀釋、及注射即可。
高效、靶向敲低
在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果
圖4. 使用Invivofectamine 3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine 3.0試劑與靶向Factor VII (FVII)或PPIB mRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1 mg(mg/kg)的注射量進行注射,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低(使用TaqMan分析對敲低進行評估)。 從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)
對 HepG2 細胞轉(zhuǎn)染效率的比較
右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到 HepG2 細胞(在膠原預(yù)處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉(zhuǎn)染 48 小時之后,用流式細胞儀檢測 GFP 陽性細胞(%)和熒光強度。
左圖:血清和***存在的條件下能提高 LipoD293 試劑(升級版)對在 HepG2 細胞的轉(zhuǎn)染效率。通過三種不同的條件下轉(zhuǎn)染 HepG2 細胞(生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無血清和***,10% 血清和***的存在,轉(zhuǎn)染 5 小時后換液和不換液。
上海pei液體轉(zhuǎn)染試劑riboFECT CP轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)用案例,可轉(zhuǎn)染各種細胞,***靠譜!
圖7.對注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進行血液化學(xué)分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復(fù)合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內(nèi)。在注射后2、24及48小時收集血液樣品,并通過臨床化學(xué)檢測方法對數(shù)個生物標志物(Antech)進行評估。結(jié)果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異。除了以上兩種于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000,Lipofectamine?3000和Neon?轉(zhuǎn)染系統(tǒng)也可以用于siRNA轉(zhuǎn)染
用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細胞,左圖轉(zhuǎn)染GFP cDNA,右圖共轉(zhuǎn)染GFP CDNA和GFP靶向siRNA。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。
4適用于神經(jīng)細胞的轉(zhuǎn)染圖4. 用LipoFectMax? 和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細胞進行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果,LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。
LipoFectMax? 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程
細胞毒性低圖2.LipoFectMax? ,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細胞進行轉(zhuǎn)染操作,通過計算轉(zhuǎn)染后的細胞存活率比較細胞毒性。 并更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細胞,用PBS洗滌3次以上,以備RNA抽提。
細胞轉(zhuǎn)染是指將外源基因如DNA,RNA等導(dǎo)入細胞內(nèi)的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制細胞基因功能、實現(xiàn)基因調(diào)控的常規(guī)工具。市場上各種轉(zhuǎn)染試劑琳瑯滿目,各有千秋,然而沒有任何一種轉(zhuǎn)染試劑可以能夠適用于所有細胞種類、滿足所有實驗需求和目的,成分控認為轉(zhuǎn)染試劑的成分及作用機理對轉(zhuǎn)染效果及細胞生理作用影響***,是轉(zhuǎn)染試劑選擇的重要依據(jù),選試劑時要留意成分哦。嚴格來講,轉(zhuǎn)染的方法可以基于化學(xué)法、物理法(電穿孔、顯微注射等)以及***介導(dǎo)法,沒有一種方法是放之四海而皆準。作為成分控的小編,本次主要為大家介紹基于各類轉(zhuǎn)染試劑的化學(xué)法轉(zhuǎn)染。所見即所得——分享兩款超好用的轉(zhuǎn)染試劑,拯救你的細胞.北京轉(zhuǎn)染試劑比較 rna
連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理。轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)
簡介:X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無動物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類真核細胞(包括昆蟲細胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細胞系。優(yōu)勢:
1.簡單易用的多組分混合試劑,無動物源性成分,室溫穩(wěn)定。
2.高轉(zhuǎn)染效率,對于原代細胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細胞系有高轉(zhuǎn)染效率。
3.使用細胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好。
圖2. X-tremeGENE HP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過X-tremeGENE HP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實驗后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細胞毒性遠高于X-tremeGENE HP,導(dǎo)致存活細胞量減少(圖片來源于網(wǎng)絡(luò))。 轉(zhuǎn)染試劑是哪些物質(zhì)