血清的保存應(yīng)該注意以下幾點:(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物較好增多,而且還會影響血清的質(zhì)量.補體參與反應(yīng)有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化.(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀.用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清.吉林驢血清gibco
血清定義指纖維蛋白原已被除去的血漿用法肌肉或靜脈注射外文名Serum作用提供和各種生長因子等形態(tài)淡黃色透明液體
血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難;
第二:血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制;
第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì),這被認為是“瓶中惡化”的原因之一。
武漢驢血清保存白蛋白攜帶維生素、脂肪等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵,在細胞代謝過程中起重要作用;
牛血清的主要分為這些種,分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。小牛血清取自出生10~30天的小牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)較高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分**少。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。牛血清中含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。
細胞增殖間期
S期DNA合成期
從G1末期到S初期、細胞內(nèi)迅速形成DNA聚合酶及四種脫氧核苷酸。S期主要特點是利用G1期準備的物質(zhì)條件完成DNA復制,并合成一定數(shù)量的組蛋白,供DNA形成染色體初級結(jié)構(gòu)。在S期末,細胞核DNA含量增加一倍,為細胞進行分裂作了準備。DNA復制一旦受到障礙或發(fā)生錯誤,就會阻擋細胞的分裂或引起變異,導致異常細胞或畸形的發(fā)生。S期持續(xù)時間大約7~8小時。G2期DNA合成后期
這一時期的主要特點是為細胞分裂準備物質(zhì)條件。DNA合成終止,但RNA和蛋白質(zhì)合成又復旺盛,主要是組蛋白、微管蛋白、膜蛋白等的合成,為紡錘體和新細胞膜等的形成備足原料。若阻斷這些合成,細胞便不能進入有絲分裂。G2期歷時較短而恒定,哺乳動物細胞一般為1~1.5小時。
有一些細胞,如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。
血清主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。對血清的成分和作用的研究雖有很大進展,但仍存在一些問題。主要是:一:血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難;二:血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制;三:不能排除血清中含有易變物質(zhì),這被認為是“瓶中惡化”的原因之一。方法采用血清學和染色體DNA脈沖場凝膠電泳圖譜分析。西安優(yōu)等胎牛血清進口
·細胞生長(快)曲線峰值:1.6×106.吉林驢血清gibco
解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃,實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。吉林驢血清gibco