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糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué):蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴(yán)重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號分散。此外,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準(zhǔn)確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標(biāo)記糖基化位點。從而實現(xiàn)高通量糖蛋白和糖基化位點的識別。常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學(xué)富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有全方面性。杭州蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)價錢
蛋白質(zhì)翻譯后修飾分析策略:早期蛋白質(zhì)組研究的大部分工作集中在細(xì)胞生長的不同時期,或疾病或有絲分裂原刺激后的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。然而,許多生命過程不僅受蛋白質(zhì)的相對豐度控制,還受時空分布可逆的翻譯后修飾控制。因此,揭示翻譯后修飾的規(guī)律是了解蛋白質(zhì)復(fù)雜性和多樣的生物學(xué)功能的前提。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾是一個復(fù)雜的過程。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷酸化。樣品中翻譯后修飾蛋白質(zhì)含量低、動態(tài)范圍廣給相關(guān)研究帶來了很大的挑戰(zhàn)。基于翻譯后修飾蛋白的異質(zhì)性和相對豐度低的特點,主要利用凝膠、生物質(zhì)譜和生物信息學(xué)工具對其進行研究。用于PTM分析的質(zhì)譜方法類似于用于“常規(guī)”蛋白質(zhì)鑒定的方法,包括自下而上、自中而下和自上而下的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。深圳蛋白質(zhì)丙二?;揎椊M學(xué)分析研究泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的作用:泛素化、心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來生物化學(xué)研究的一個重大成果,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點。技術(shù)原理是首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢:高特異性的修飾抗體;高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀;鑒定通量高;可與代謝組學(xué)等進行多組學(xué)聯(lián)合分析。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢:1、高特異性的修飾類泛抗體;2、高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀;應(yīng)用領(lǐng)域:泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期、增殖、細(xì)胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調(diào)控。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來生物化學(xué)研究的一個重大成果,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點。蛋白質(zhì)發(fā)生翻譯后修飾時其分子質(zhì)量會發(fā)生響應(yīng)的改變,通過質(zhì)譜能夠精確測定蛋白質(zhì)或多肽的分子質(zhì)量。
蛋白質(zhì)乙酰化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):乙?;揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾,對細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調(diào)節(jié)。乙?;揎椊M學(xué)技術(shù)服務(wù)采用肽段預(yù)分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,再結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩危瑥亩鴮崿F(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導(dǎo)了真核生物體內(nèi)80%~85%的蛋白質(zhì)降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質(zhì)的活性和定位,調(diào)控包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA 損傷修復(fù)以及免疫應(yīng)答等在內(nèi)的多種細(xì)胞活動。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。杭州蛋白質(zhì)棕櫚酰化修飾組學(xué)價錢
質(zhì)譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。杭州蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)價錢
蛋白質(zhì)翻譯后修飾加入的官能團反應(yīng)有:1、乙?;ǔS诘鞍踪|(zhì)的N末端加入乙酰。2、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3、甲基化——烷基化中常見的一種,在賴氨酸、精氨酸等的側(cè)鏈氨基上加入甲基。4、生物素化——用生物素附加物令保存的賴氨酸酰化。5、谷氨酸化——在谷氨酸與導(dǎo)管素及其他蛋白質(zhì)之間建立共價鍵。6、甘氨酸化——在一個至超過40種甘氨酸與導(dǎo)管素的C末端建立共價鍵。7、糖化——將糖基加入天冬酰胺、羥離氨酸、絲氨酸或蘇氨酸,形成糖蛋白。8、異戊二烯化——加入如法呢醇及四異戊二烯等異戊二烯。9、硫辛酸化——附著硫辛酸的功能性。杭州蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學(xué)價錢