蛋白質(zhì)組學在生物學領(lǐng)域的研究中的應用是怎樣的?研究對象涉及到生物體且生物體內(nèi)表達蛋白,理論上都可以應用蛋白質(zhì)組學。蛋白質(zhì)組學是以研究生物體蛋白組成及其變化規(guī)律為目的的應用科學。主要使用的儀器為液質(zhì)聯(lián)用高分辨率質(zhì)譜儀。詳細來說,蛋白質(zhì)組學包含許多分支:非標定量蛋白質(zhì)組學(定性研究生物體的蛋白組成),定量蛋白質(zhì)組學(對生物體蛋白表達含量進行測定),修飾蛋白質(zhì)組學(對蛋白質(zhì)翻譯后修飾進行檢測)及相互作用蛋白質(zhì)組研究(蛋白質(zhì)直接相互作用機制解析)等。蛋白質(zhì)組學屬于后基因組時代的科學研究,針對基因表達產(chǎn)物進行檢測與定量。因此更能反應出生物體生理條件下的水平與狀態(tài)。蛋白質(zhì)組學包括蛋白質(zhì)的表達水平。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學分析方法
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質(zhì)定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)是否存在于樣品當中;第2,蛋白質(zhì)定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質(zhì)的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質(zhì)翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊?,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數(shù)量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數(shù)量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調(diào)控和翻譯后調(diào)控的存在,RNA的表達量與實際對應蛋白質(zhì)的含量相關(guān)性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應蛋白質(zhì)的定量相關(guān)性,結(jié)果是,低豐度蛋白與mRNA的相關(guān)性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關(guān)性則高,經(jīng)過平均后r值只為0.4。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學分析方法蛋白質(zhì)組學由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。
LabelFree(非標記蛋白質(zhì)組學技術(shù)):在非標記策略的定量模型中,主要涉及兩種不同的算法:其一,以肽段的色譜峰積分面積為基礎(chǔ),通過比較一對生物樣品中相對應到蛋白質(zhì)酶解多肽的色譜積分面積而得到兩者的相對豐度;其二,以肽段被質(zhì)譜檢測的計數(shù)為基礎(chǔ),通過歸一化來表征被檢測蛋白質(zhì)的相對豐度。非標記技術(shù)認為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測的頻率(Counts)與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測的計數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過適當?shù)臄?shù)學公式可以將質(zhì)譜檢測計數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對蛋白質(zhì)進行定量。
Labelfree非標記定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)特點:(1)不需要標記處理,操作簡單,成本低、實驗周期短;(2)每個樣品單獨處理、上機;(3)可以做任意樣本的總蛋白質(zhì)差異定量,樣品類型不受限制;(4)對單個樣品的蛋白總量要求相對較低,對于組織本身蛋白量不高,可以選擇Label-Free,適用于一些難收集樣品;(5)定性沒有問題,但是定量的準確性較標記定量稍差,會受到質(zhì)譜穩(wěn)定性等因素的影響;(6)適合于大樣本量的定量比較(大于24個樣本)。蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質(zhì)組學技術(shù)有等電聚焦。
PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學分析流程是怎樣的?要做PRM首先要明確目標蛋白(或多肽)是什么,設(shè)計和建立針對這些目標蛋白PRM質(zhì)譜采集方法,然后對待測樣品進行PRM數(shù)據(jù)采集,將得到的原始譜圖數(shù)據(jù)導入分析軟件提取子離子信息進行定量。另外,如果配制已知濃度的標準肽段,用PRM額外做一個標準曲線,即可實現(xiàn)一定的定量。PRM靶向定量蛋白質(zhì)組學技術(shù)能應用到哪些方面?研究工作中涉及到蛋白或多肽定量的都可以通過PRM技術(shù)來實現(xiàn)。具體說來,比如驗證定量蛋白質(zhì)組學中某些蛋白的變化,多肽的相對和一定的定量,想做蛋白定量卻沒有抗體,針對蛋白修飾位點的定量,想同時定量多個蛋白的情況等,都可以用PRM來做。蛋白質(zhì)組研究技術(shù)在研究對象上,覆蓋了原核微生物、真核微生物、植物和動物等范圍。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學分析方法
蛋白質(zhì)組學將成為尋找疾病分子標記和藥物靶標比較有效的方法之一。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學分析方法
蛋白質(zhì)組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質(zhì)組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質(zhì)組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學,包括對蛋白質(zhì)表達模式和蛋白質(zhì)組功能模式的研究。蛋白質(zhì)組學的發(fā)展對尋找疾病的診斷標志、篩選藥物靶點、毒理學研究等有重要意義,也因此被普遍應用于醫(yī)學研究。蛋白質(zhì)組學研究,總體可分為一下幾個步驟:(1)差異篩選(Discovery)(2)初步驗證(Verification)(3)然后確診(Validation)。基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學是目前比較主流的高通量蛋白質(zhì)研究手段,當前在醫(yī)療健康方面的應用主要集中于基礎(chǔ)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學。貴陽高通量蛋白質(zhì)組學分析方法
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