湖北動物靶向代謝組學(xué)定量分析

來源: 發(fā)布時間:2022-01-26

代謝組學(xué)介紹:通過液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)方法檢測生物體受外界刺激前后體內(nèi)大多數(shù)小分子代謝物的動態(tài)變化,重點尋找在實驗組和對照組中有明顯變化的代謝物,進(jìn)而研究這些代謝物與生理病理變化的相關(guān)關(guān)系,其研究對象大多是分子量1500Da以內(nèi)的小分子物質(zhì)。技術(shù)優(yōu)勢:較高的靈敏度、分辨率;較寬的動態(tài)范圍;適合對標(biāo)本中未知代謝物的探索研究;適合于生物樣本中復(fù)雜代謝產(chǎn)物的檢測和潛在標(biāo)志物的鑒定。代謝組學(xué)應(yīng)用方向: 土壤代謝組學(xué)。研究土壤中有機質(zhì)及土壤微生物代謝含量變化及相互作用,了解土壤微生物多樣性及其碳代謝能力,為探索調(diào)節(jié)、控制和改善土壤環(huán)境質(zhì)量提供重要的參考。代謝組學(xué)關(guān)注的對象是分子量在1000以下的小分子化合物。湖北動物靶向代謝組學(xué)定量分析

靶向代謝組學(xué)分析成功的關(guān)鍵因素是準(zhǔn)確度、高通量和可靠性。靶向代謝組學(xué)鑒定一般采用 GC/MS 系統(tǒng)的選擇性離子監(jiān)測 (SIM),或在三重串聯(lián)四極桿 LC/MS 系統(tǒng)上用多反應(yīng)離子監(jiān)測 (MRM) 進(jìn)行靶向 MS/MS。SIM 比全掃描圖譜采集具有更高的靈敏度,在單四極桿質(zhì)譜中,這種靈敏度增強的原因是延長了所選擇離子的采集時間。因為監(jiān)測的是一個很小的質(zhì)量窗口,所以質(zhì)量色譜圖只表示對極為特定質(zhì)量的檢測。在大多數(shù)情況下,靈敏度可以提高 10 倍。MRM 是進(jìn)行質(zhì)譜定量的選擇方法,與 SIM 相比更為靈敏、更加特異??梢援a(chǎn)生獨特的碎片離子,可對非常復(fù)雜基質(zhì)中的目標(biāo)化合物進(jìn)行監(jiān)測和定量。河南常規(guī)靶向代謝組學(xué)服務(wù)代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的一個重要的分支,與其他組學(xué)相比有著其特有的優(yōu)勢。

代謝組學(xué)概念:基因與蛋白質(zhì)的表達(dá)緊密相連,而代謝物則更多地反映了細(xì)胞所處的環(huán)境,這又與細(xì)胞的營養(yǎng)狀態(tài),藥物和環(huán)境污染物的作用,以及其它外界因素的影響密切相關(guān)。因此有人認(rèn)為,“基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)告訴你什么可能會發(fā)生,而代謝組學(xué)則告訴你什么確實發(fā)生了?!贝x組學(xué)的概念來源于代謝組,代謝組是指某一生物或細(xì)胞在一特定生理時期內(nèi)所有的低分子量代謝產(chǎn)物,代謝組學(xué)則是對某一生物或細(xì)胞在一特定生理時期內(nèi)所有低分子量代謝產(chǎn)物同時進(jìn)行定性和定量分析的一門新學(xué)科。它是以組群指標(biāo)分析為基礎(chǔ),以高通量檢測和數(shù)據(jù)處理為手段,以信息建模與系統(tǒng)整合為目標(biāo)的系統(tǒng)生物學(xué)的一個分支。

什么是非靶向代謝組學(xué)、靶向代謝組學(xué)?(1) 非靶向代謝組學(xué)(Untargeted metabolomics)即非目標(biāo)代謝組學(xué)或發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué),無偏向性地對所有小分子代謝物(一般相對分子量小于1000)同時進(jìn)行檢測分析的代謝組學(xué)。(2) 靶向代謝組學(xué)(Trgeted metabolomics)則為目標(biāo)性代謝組學(xué),著重對于設(shè)定好的目標(biāo)代謝物進(jìn)行定性、量檢測分析和研究。相比于其他組學(xué),代謝組學(xué)有哪些特殊的優(yōu)勢?系統(tǒng)生物學(xué)有基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)。代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的一個重要的分支,與其他組學(xué)相比有著其特有的優(yōu)勢,主要體現(xiàn)在以下幾點:(1) 基因與蛋白質(zhì)表達(dá)的微小變化會在相應(yīng)代謝物水平上得到放大,更容易被檢測。(2) 代謝物的種類要遠(yuǎn)小于基因和蛋白的數(shù)目。(3) 可與生物表型變化建立直接相關(guān)性。代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似。

代謝組學(xué)樣品收集方法及所需樣本量是什么?(1) 血清樣品: 避免反復(fù)凍融。血液收集在離心管中靜置30分鐘進(jìn)行凝血。8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存;單個樣本要求體積為50μL。(2) 尿液樣品:臨床樣本請全部取清晨第1次尿液。尿液直接分裝到離心管中,8000rpm離心10分鐘,取上清分裝到凍存管中,放置液氮中或-80度凍存,-80度凍存;單個樣本要求體積為100μL。(3) 其他樣本收集辦法請咨詢譜領(lǐng)工作人員。代謝組學(xué)技術(shù)得到了迅速發(fā)展。廣東非靶向代謝組學(xué)分析

代謝組學(xué)先進(jìn)分析檢測技術(shù)結(jié)合模式識別和**系統(tǒng)等計算分析方法是代謝組學(xué)研究的基本方法。湖北動物靶向代謝組學(xué)定量分析

代謝組學(xué)尿液樣本收集:1)取空腹晨尿、中段尿(臨床)或晨間1 h尿(動物)于50 mL離心管中;2)4 ℃ 下10000 rpm離心10 min取上清,用1.5 mL離心管分裝,保存于-80 ℃。3)動物1 h尿量不夠的情況下,可分多次收集尿液;如需收取24 h尿液,需要使用帶低溫裝置的代謝籠收集,并且及時凍存樣本。4)收集完尿液樣本后,建議使用液氮淬滅15 min后,再分裝多管后于-80 ℃凍存。組織樣本收集:動物組織(包括腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮膚等;軟體動物如血吸蟲):1)取適量組織,用預(yù)冷的PBS緩沖液或生理鹽水清洗干凈;2)迅速剝?nèi)シ潜匦璧闹竞徒Y(jié)締組織,再用PBS緩沖液或生理鹽水沖洗干凈;3)用干凈的無塵吸水紙吸干水分,將組織分成50-100 mg / 管分裝待用;4)管子上做好標(biāo)記后迅速放入液氮中冷凍處理至少15 min,-80 ℃凍存;干冰運輸。湖北動物靶向代謝組學(xué)定量分析

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