HE染色細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著***況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時,伊紅著色由淺變深。HE染色,一站式實驗外包服務平臺。河北推薦的HE染色分析
HE染色注意事項:1.組織切片的脫蠟步驟應徹底,否則無論進行那種染色都會發(fā)生困難。脫蠟時間要充分,若溶蠟劑使用過久應及時更換以免效率降低,若室溫過低,可將溶蠟劑置于溫箱中進行脫蠟。 2.蘇木素染液使用一段時間后表面易出現(xiàn)亮晶狀飄浮物,這可能是液體表面的過氧化物,必須過濾除去,以防沉渣污染組織切片。蘇木素液一般染過三、四百張切片后,著色力會減弱,著色不鮮艷,呈灰藍色時應及時更換新液。 3.染色的時間長短需依據(jù):染劑對組織的染色作用,室溫條件,切片厚薄,固定液的類別,染液的新舊而進行調(diào)節(jié)。所以在染色時必須使用顯微鏡觀察染色程度以利掌握時間。 4.分化十分重要。分化步驟的準確也是染色成敗的關鍵,若分化失當則必然引起染色不勻或過淡,過深等現(xiàn)象,因此分化后一定要鏡檢,觀察胞核是否清晰,胞漿呈淡白色。否則需再次分化,不然一旦復染后,組織會呈紫藍色即“藍蓋紅”現(xiàn)象。 5.還原液不宜過濃,若堿性太強易使組織脫落故以淡為宜。 6.伊紅宜淡染,復染過深胞核會不清晰,影響鏡檢。 河南HE染色檢測HE染色原理 試劑 染色步驟 注意事項 。
HE染色細胞質過染分析及應對原因:(1)伊紅染色液濃度太高,特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在;(2)切片在伊紅染色時間過長;(3)切片在伊紅染色后經(jīng)乙醇脫水步驟時過的太快,而使乙醇分化伊紅的作用不能產(chǎn)生。對策:適當稀釋伊紅染色液,減少伊紅染色時間,或者使切片在乙醇脫水等步驟時,停留時間相對均勻。同樣,也要檢查切片的厚度是否合適。切片中出現(xiàn)藍黑色沉淀物分析及應對原因:蘇木精染色液中的金屬膜,黏附在玻片上。對策:每天染色前仔細過濾蘇木精染色液,或建議使用半氧化蘇木精染色液,如Gill蘇木精染色液,可以避免過多的金屬膜產(chǎn)生。
HE染色注意事項:1、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后,分色這一步是關鍵,應在顯微鏡下控制進行,一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色。3、切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),此為脫水不徹底,應將切片退回無水酒精,更換酒精、二甲苯,以求徹底脫水與透明。4、在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經(jīng)元形態(tài)。5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前,切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時,要用中性樹脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當,樹脂封固時不能有氣泡。肺部組織HE染色如何觀察。
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項:多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中,固定完成后用適當?shù)南礈煲夯蛩疀_洗數(shù)小時仍會有殘留,因此后續(xù)實驗結果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。HE染色的實驗目的以及實驗結果分析。河南HE染色檢測
HE染色中固定液如何配置。河北推薦的HE染色分析
HE染色常見問題:Q5:細胞核呈棕紅色改變答:蘇木素染液過度氧化;或蘇木素染色后反藍不足導致。應該立即更換蘇木素染色液?;蛟诹鲃幼詠硭?一般自來水PH7.5-7.8),或在稀釋的氨水溶液,或在0.2%碳酸氫鈉中適當浸泡,這些步驟均可一定程度地加強蘇木素染色后的反藍效果。Q6:伊紅染色較淡答:伊紅的PH改變了(PH可能已大于5);或反藍液體未漂洗干凈,殘留后影響胞漿嗜酸性染色;或者切片太薄并且在隨后的脫水步驟停留過久。對策:檢查伊紅染色液PH,可采用乙酸調(diào)至4.6-5.0。根據(jù)以上提示,調(diào)整實驗步驟。河北推薦的HE染色分析